產(chǎn)品詳情
cho-s細胞
- 產(chǎn)品名稱：cho-s細胞
- 產(chǎn)品型號：cho-s
- 產(chǎn)品廠商：乾思中心
- 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹
cho-s細胞
cho-s細胞
的詳細介紹中國倉鼠 卵巢細胞
(CHO-S)
細胞介紹
貼壁生長及懸浮生長均可（用于蛋白表達時，應使用懸浮生長狀態(tài)，此時細胞生
長狀態(tài)更好，比表面積更高，生物反應器中的傳質、傳熱效率更高，同時也可提
高生物反應器空間使用效率。工業(yè)上大規(guī)模生產(chǎn)單抗，重組蛋白，大部分使用懸
浮培養(yǎng)法來生產(chǎn)）
細胞特性
1 來源：中國倉鼠
2 形態(tài) ：成纖維細胞樣
3 含量：>1x10 6 個/mL
4 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運輸和保存 ：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后
立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細
胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基 及 培養(yǎng) 凍存 條件準備：
1）培養(yǎng)基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically
Defined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C)
添加物：
L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）
Anti-Clumping Agent(Gibco，貨號：01-0057AE)
備注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 請按照培養(yǎng)基配制說明書配制，L-谷氨酰
胺配制濃度為 200mM，工作濃度為 8mM（即稀釋 25 倍，如 500ml CHO Serum-free
Medium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗結團劑使用為 1%，即 500ml CHO
Serum-free Medium 中添加 5ml 抗結團劑）
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱
濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞 處理 ：
傳代、轉染、建庫及實驗室規(guī)模小試方法：
賽百慷（上海）生物技術股份有限公司提供的 CHO-S 細胞為已馴化的細胞，具有
良好的適應懸浮生長及適應無血清培養(yǎng)基生長特性。
傳代方法：
1.10cm 皿中培養(yǎng)：使用計數(shù)器（計數(shù)器或者血球計數(shù)板計數(shù)）計數(shù)，接種密度
為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提前 37℃預熱的新鮮培養(yǎng)基中（建議培養(yǎng)基取 7-8ml，
此時細胞生長狀態(tài)較好），置于搖床上生長，轉速為 120-130rpm，濕度為 70-80%，
5%二氧化碳，溫度為 37℃。
2.培養(yǎng)約 2-3 天，細胞密度達到 1×10 6 個活細胞/ml 時，應 1000rpm，25℃離心
5min，離心后計數(shù)（此時應稀釋），然后接種密度為 3×10 5 個細胞/ml 接種于提
前 37℃預熱的新鮮培養(yǎng)基中。細胞數(shù)目足夠時，可凍存。
也可選擇 125ml 或者 250ml 搖瓶中培養(yǎng)細胞。（注意細胞培養(yǎng)液體積一般在總體
積的五分之一，如在 125ml 搖瓶中加入 25ml 培養(yǎng)物，應注意在搖瓶中培養(yǎng)細胞
時應將瓶蓋稍微擰松，以便于氣體交換，同時也不宜擰得過松，防止細胞污染）
轉染方法：
在連續(xù) 5 代細胞密度未超過 2×10 6 個活細胞/ml 時，可以使用 FreeStyle Max 轉
染試劑（Gibco，貨號：16447）在 CD CHO Serum-free Medium 中直接轉染。（注
意：Anti-Clumping Agent 會干擾 FreeStyle Max 轉染試劑轉染效率，同時也會干擾
其他脂質體型轉染試劑的轉染效率）
建庫方法 ：
若需要建庫，可將細胞接種于 125ml 搖瓶中（接種密度為 3×10 5 個細胞/ml，總
體積為 25ml），此方法同樣適用于穩(wěn)定表達所需要蛋白的細胞株的建庫工作。建
庫時，需要先建初級庫（master bank）（一般為 10 支，每支細胞總數(shù)不少于 4.5
×10 7 個細胞），此步驟結束后，從凍存的初級庫中取出一支復蘇，按照同樣步驟
建次級庫（working bank）（相同的，一般為 10 支，每支細胞總數(shù)不少于 4.5×10 7
個細胞）。
實驗室 規(guī)模小試方法：
將挑選出的穩(wěn)定細胞株從 96 孔板到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿中逐級擴大培養(yǎng)
后（此時需要注意在培養(yǎng)過程中應及時保種，以防止后續(xù)步驟出現(xiàn)污染，及應對
可能的表達量衰退現(xiàn)象）以 3×10 5 個細胞/ml 接種于 125ml 搖瓶中，轉速為
120-130rpm，溫度為 37℃，濕度為 70-80%，連續(xù)培養(yǎng)一周，每天取樣做出相應
的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，可根據(jù)實際情況，每天取樣測
出培養(yǎng)基中葡萄糖含量，以便決定是否需要補加葡萄糖，同時可使用 CHO Feed
Bioreactor Supplement 作為細胞發(fā)酵中補料，同時做出相應的細胞生長曲線，細
胞活率曲線，蛋白表達曲線，為中試放大補料添加做出合理數(shù)據(jù)支持。
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立
即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內操作，并請注
意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。